特徴 | ||||
酒石酸耐性酸性ホスファターゼ(Tartrate-Resistant Acid Phosphate:TRAP)は、破骨細胞の分化マーカーとして広く認識されており、破骨細胞の培養においては、分化に伴い培地中に放出されます1)2)。本製品は、培養破骨細胞のTRAP活性を検出する試薬セットで、破骨細胞の分化や骨粗鬆症薬の評価にご使用いただけます。培養上清または固定した細胞に、p-ニトロフェニルリン酸を含むTRAP基質溶液を加え、TRAP酵素の反応により生じたp-ニトロフェノールを405nmの吸光度により検出する簡便な方法です。 |
||||
セットの構成 | ||||
@TRAP Assay Substrate Solution(製品コード:TRAP-S1、15mL、2本) | ||||
ATRAP Assay Stop Solution(製品コード:TRAP-E1、15mL、2本) | ||||
![]() |
||||
使用方法 | ||||
培養上清のTRAP活性 | ||||
(1) マウスマクロファージ細胞株RAW264.7を、10%FBS含有MEMαまたはDMEM/F-12にて培養プレートに播種し、同時にRANKLおよび評価薬剤を添加して培養する。 96well:2,000cells/0.2mL/well 48well:5,000cells/0.5mL/well 24well:10,000cells/1mL/well |
||||
(2) 培養72時間後あるいは96時間後に、吸光度測定用の96wellプレートに培養上清を50μLずつ回収する。 | ||||
(3) 各wellの上清にTRAP Assay Substrate Solutionを50μLずつ添加、混合した後、37℃で30分間〜1時間反応(遮光)する。 | ||||
(4) 各wellにTRAP Assay Stop Solutionを50μLずつ添加して(この時点で発色します)、撹拌する。 | ||||
(5) 405nmの吸光度を測定する。 |
||||
細胞のTRAP活性 |
||||
(1) 培養プレートの各wellの培地を除去した後、10%中性緩衝ホルマリン溶液を添加して細胞を固定する。 | ||||
(2) 測定時に、固定液を除き、精製水(0.2〜1mL)にて各wellの細胞を2回洗浄する。 |
||||
(3) 下記容量のTRAP Assay Substrate Solutionを添加、37℃で30分間〜1時間反応(遮光)する。 96wellプレート:100μL/well 48wellプレート:250μL/well 24wellプレート:500μL/well |
||||
(4) TRAP Assay Substrate Solutionと同量のTRAP Assay Stop Solutionを添加して(この時点で発色します)、軽く撹拌する。 | ||||
(5) 反応液を吸光度測定用の96wellプレートに100μLずつ回収後、405nmの吸光度を測定する。 | ||||
注意事項 |
||||
(1) フェノールレッドを含む培養上清にもご使用いただけます。 |
||||
(2) TRAP基質との反応の際は遮光し、ご使用の培養系に合わせて反応時間を調節してください。反応停止液を添加した段階で発色します。 | ||||
(3) リン酸カルシウム固層化プレート(骨吸収活性評価プレート)を用い、細胞のTRAP活性を測定する場合、Stop Solution添加により白濁しますので、2,000
x g、3分間遠心した後の上清を使用してください。 |
||||
参考データ |
||||
|
||||
![]() |
||||
図2.RAW264.7細胞(96wellプレート、10%FBS/MEMα)を、播種と同時にRANKL(100ng/mL)およびAlendronateを添加して72時間培養し、培養上清および細胞を回収した。 A:培養上清50μLにSubstrate Solution を50μL、B:固定/洗浄後の細胞にSubstrate Solution を100μL添加して、37℃で1時間反応させた。Stop Solutionを加えた後、405nmの吸光度を測定した。RANKLにより誘導されたTRAP活性をControl (100)とし、%値で示した。(Mean±SD、n=6) |
||||
引用文献 |
||||
1) Alatalo SL, Clin Chem, 2000, 46(11):1751-1754. 2) Lv Y, Exp Ther Med, 2015, 9(1):143-146. |
セットおよび構成品
製品コード | 品名 | 仕様 | 貯法 | 価格 | 添付文書 |
TRAP-SET | TRAP Assay Set | TRAP-S1 TRAP-E1 各2本 |
冷凍 (−20℃以下) |
\21,000 | ![]() |
)