製品情報TRAP Assay Set
TRAP Assay Set
| 特徴 | ||||
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酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（Tartrate-Resistant Acid Phosphate:TRAP）は、破骨細胞の分化マーカーとして広く認識されており、破骨細胞の培養においては、分化に伴い培地中に放出されます1)2)。本製品は、培養破骨細胞のTRAP活性を検出する試薬セットで、破骨細胞の分化や骨粗鬆症薬の評価にご使用いただけます。培養上清または固定した細胞に、p-ニトロフェニルリン酸を含むTRAP基質溶液を加え、TRAP酵素の反応により生じたp-ニトロフェノールを405nmの吸光度により検出する簡便な方法です。 |
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| セットの構成 | ||||
| ①TRAP Assay Substrate Solution（製品コード：TRAP-S1、15mL、2本） | ||||
| ②TRAP Assay Stop Solution（製品コード：TRAP-E1、15mL、2本） | ||||
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| 使用方法 | ||||
| 培養上清のTRAP活性 | ||||
| (1) マウスマクロファージ細胞株RAW264.7を、10%FBS含有MEMαまたはDMEM/F-12にて培養プレートに播種し、同時にRANKLおよび評価薬剤を添加して培養する。 96well：2,000cells/0.2mL/well 48well：5,000cells/0.5mL/well 24well：10,000cells/1mL/well |
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| (2) 培養72時間後あるいは96時間後に、吸光度測定用の96wellプレートに培養上清を50μLずつ回収する。 | ||||
| (3) 各wellの上清にTRAP Assay Substrate Solutionを50μLずつ添加、混合した後、37℃で30分間～1時間反応（遮光）する。 | ||||
| (4) 各wellにTRAP Assay Stop Solutionを50μＬずつ添加して（この時点で発色します）、撹拌する。 | ||||
| (5) 405nmの吸光度を測定する。 |
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| 細胞のTRAP活性 |
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| (1) 培養プレートの各wellの培地を除去した後、10%中性緩衝ホルマリン溶液を添加して細胞を固定する。 | ||||
| (2) 測定時に、固定液を除き、精製水（0.2～1mL）にて各wellの細胞を2回洗浄する。 |
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| (3) 下記容量のTRAP Assay Substrate Solutionを添加、37℃で30分間～1時間反応（遮光）する。 96wellプレート：100μL/well 48wellプレート：250μL/well 24wellプレート：500μL/well |
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| (4) TRAP Assay Substrate Solutionと同量のTRAP Assay Stop Solutionを添加して（この時点で発色します）、軽く撹拌する。 | ||||
| (5) 反応液を吸光度測定用の96wellプレートに100μLずつ回収後、405nmの吸光度を測定する。 | ||||
注意事項 |
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| (1) フェノールレッドを含む培養上清にもご使用いただけます。 |
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| (2) TRAP基質との反応の際は遮光し、ご使用の培養系に合わせて反応時間を調節してください。反応停止液を添加した段階で発色します。 | ||||
| (3) リン酸カルシウム固層化プレート（骨吸収活性評価プレート）を用い、細胞のTRAP活性を測定する場合、Stop Solution添加により白濁しますので、2,000
x g、3分間遠心した後の上清を使用してください。 |
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参考データ |
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| 図2．RAW264.7細胞(96wellプレート、10%FBS/MEMα)を、播種と同時にRANKL(100ng/mL)およびAlendronateを添加して72時間培養し、培養上清および細胞を回収した。 A：培養上清50μLにSubstrate Solution を50μL、B：固定／洗浄後の細胞にSubstrate Solution を100μL添加して、37℃で1時間反応させた。Stop Solutionを加えた後、405nmの吸光度を測定した。RANKLにより誘導されたTRAP活性をControl (100）とし、%値で示した。(Mean±SD、n=6) |
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| 引用文献 |
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| 1) Alatalo SL, Clin Chem, 2000, 46(11):1751-1754. 2) Lv Y, Exp Ther Med, 2015, 9(1):143-146. |
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セットおよび構成品
| 製品コード | 品名 | 仕様 | 貯法 | 価格 | 添付文書 |
| TRAP-SET | TRAP Assay Set | TRAP-S1 TRAP-E1 各2本 |
冷凍 （－20℃以下） |
\21,000 |  |